A Quick Introduction to Synthetic Biology

常用试剂汇总与部分试剂配制

对于大部分实验,各个生物公司会推出该实验的试剂盒,其中包含了此部分所有需要的试剂和特殊耗材。请按照使用说明储存各个试剂。如因意外损耗导致试剂盒中某种特定试剂不足,可向公司单独订购补充装。除此之外,对于某些成分较为简单且消耗量大的试剂,我们可以在实验室自己制备,是资金不足时的好对策。

1. DNA提取与质粒纯化

从细菌/细胞中提取 DNA 或质粒,用于后续 PCR、酶切等实验

质粒小提/大提试剂盒(Plasmid mini/maxiprep kit)

基因组DNA提取试剂盒(Genomic DNA extraction kit)

凝胶回收试剂盒(Gel extraction kit)

2. PCR

扩增目标 DNA 片段,克隆到载体中

➢ Q5 master mix

3. 酶切与链接

剪切并连接 DNA 片段,构建载体

➢ 10* T4 DNA ligase buffer

➢ T4 DNA ligase

➢ Bsal酶

4. 琼脂糖凝胶电泳

验证DNA长度,确定上一步实验是否成功

➢ 核酸染料

➢ 50*TAE buffer/TBE buffer

使用时1:50稀释,常温储存

➢ 琼脂糖(agarose)

制胶:
琼脂糖 (Agarose) 1 g
1x TAE/TBE 100 mL
微波加热至完全溶解
待温度稍降,加入核酸染料
倒入已经已经放置好底座的磨具中,插入梳子,保持水平
静待约20分钟即可使用

5. DNA转化

将构建好的质粒导入细菌,培养克隆

➢ 感受态细胞

(DH5α, BL21, Stbl3, NEB 10-beta等)

6. 培养

细菌生长、筛选阳性克隆

➢ 琼脂粉

➢ LB肉汤(或自己按营养成分配)

液体培养液配制:(按比例运算)
25g LB肉汤
1000mL 水
高温高压灭菌后使用,4度保存

固体培养基配制:(按比例运算)
5g LB肉汤
3.75g 琼脂粉
250mL 水
高温高压灭菌后,可待温度稍降,按照筛选需求加入过滤后的特定抗生素(如K抗比例为1:1000,在总量为250mL时加入250微抗生素)
铺板
标记日期及抗性,待凝固后4度保存

➢ 5*M9 minimal salt(或自己按营养成分配)

使用时需1:5稀释,并根据需求添加碳源或微量成分,4度保存

➢ 抗生素

Ampicillin/ Kanamycin/ Chloramphenicol/ Tetracycline
根据厂家说明在使用前稀释,-20度保存

➢ IPTG粉末

配制:
IPTG 23.8 g
超纯水补足至 100 mL
过滤除菌(0.22 µm滤膜)
-20°C 保存

7. 蛋白胶SDS-PAGE

验证蛋白表达等

➢ SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒

➢ Loading buffer

➢ DTT还原剂

请根据生物公司提供的protocol处理蛋白样本

➢ Running buffer

➢ SDS裂解液

➢ 蛋白Marker

➢ 考马斯亮蓝染色+脱色液

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